介绍一种不需胶回收就可直接连接的方法
发布于 2004-02-19 · 浏览 1978 · IP 上海上海
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跑电泳时用低熔点的agarose胶，跑到一定时候，将目的条带所在的那一段胶切下，尽量切干净，让核酸直接暴露在胶的表面，并且，把底下没有脱氧核算的那点胶也尽量切掉，然后放入1.5ml EP管中，然后放在负75度冰箱中10－30分钟，接着1，300rpm离心5－10分钟，取10ul上清，加入连接体系中。将其余的液体也吸出，储存在另一个管子中，做好标记，放在－20度备用。
这个方法我只用过一次，实验证明，还是可以用的。它节省时间，另一方面，不需要专门的胶回收试剂盒，但是它也有缺点，比如上清中DNA的浓度可能不高（我没有测过），导致连接产物浓度低，转化后阳性克隆少。
我不知道有没有人也用过这种方法。这里提出几个问题想问问大家：
1）这种方法对目标片段的大小有没有限制，毕竟，它需要离心时，DNA能从胶中迁移出来，还有环状的是不是也可以？
2）这种方法所得到的DNA的回收率大约是多少，DNA的浓度是多少？
这个方法我只用过一次，实验证明，还是可以用的。它节省时间，另一方面，不需要专门的胶回收试剂盒，但是它也有缺点，比如上清中DNA的浓度可能不高（我没有测过），导致连接产物浓度低，转化后阳性克隆少。
我不知道有没有人也用过这种方法。这里提出几个问题想问问大家：
1）这种方法对目标片段的大小有没有限制，毕竟，它需要离心时，DNA能从胶中迁移出来，还有环状的是不是也可以？
2）这种方法所得到的DNA的回收率大约是多少，DNA的浓度是多少？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1978
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