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【求助】紧急求助PFGE,细菌分型

发布于 2006-08-12 · 浏览 6132 · IP 浙江浙江
这个帖子发布于 18 年零 272 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做细菌的同源性分析,用的是PFGE,但是做了两次,都没有结果。
我用的大概的步骤是这样的:
1. 5ml LB摇细菌过夜。
2. 收集细菌,用TE缓冲液洗涤一次,再用TE缓冲液调细菌浊度为4个麦氏点。
3. 用2%的低熔点胶与细菌悬液等体积混合(我用的200微升)将混匀的胶注入模子当中,4度凝固。
4. 将胶块取出,每块胶大约用了170微升的混合胶,将凝固的胶一分为二,分别装入灭菌的离心管中。
5. 用细菌裂解液(1%十二烷基肌氨酸钠,tris ,EDTA)配制含有蛋白酶K的消化液,使最终浓度达到500微克/毫升。
6. 将含有500微克/毫升的蛋白酶K的消化液500微升加到盛有胶块的离心管中,50℃消化过夜(大约15小时吧)。
7. 将消化液倒出,并用1ml TE缓冲液洗涤胶块四次,每次半个小时。
8. 将洗涤好的胶块放入500微升反应体系的内切酶反应液中(用的是Xba I , 500单位)37℃酶切6小时。
9. 将胶块从酶切反应液中取出上样。
10. 设置条件开始电泳。电泳24小时,EB染色半小时,中止反应。紫外灯下拍照。
结果成了下面的图
还请高人分析一下是怎么回事,多谢了!!
由于急着出结果,在线等!!
图:加样空在上面
img
















最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 6132

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