发帖
每发1个新帖
可以获得0.5个丁当奖励
回帖

【求助】示踪剂——荧光金在体内能持续多长时间不衰减而被荧光显微镜检测到？

只看楼主
页码直达：
直达末页

楼主

mickeyzq

公共卫生与预防医学

丁香园中级站友

1楼

这个帖子发布于13年零142天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

最近在做荧光金的示踪，片子已经切好，但是没有时间看片子，因为是第一次做，所以不知道荧光金在体内能持续多长时间不衰减，有站友做过这方面实验的吗？

邀请讨论

搜索

2006-07-27 13:53 浏览 : 4166 回复 : 4

投票
收藏 11
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 【达人冲刺】看图识病：心前区不适10小时余

peilei1981

急诊科

丁香园准中级站友

+1 积分
2楼

通常所说的免疫金技术是应用胶体金作为标记物的免疫金染色(IGS),与免疫荧光和免疫酶技术比起来有许多独特的优点.其中有一条,就是适用范围广泛,在荧光显微镜上添一块特制的滤板(IGS filter block), 可直接对胶体金颗粒进行观察,金颗粒在荧光显微镜下呈现明亮的点状荧光,定位准确,敏感性高,标本可长期保存.

2006-07-28 10:30

投票 1
收藏
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 【分享】中山大学考博资料

peilei1981

急诊科

丁香园准中级站友

+1 积分
3楼

以下是一篇荧光金逆行示踪的一篇文献,后面也有外文文献参考

荧光金逆行标记大鼠视网膜神经节细胞

【摘要】目的将荧光金（flurogold,FG）注射于SD大鼠上丘，观察到被FG逆行标记的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)，以及SD大鼠RGC的数目及分布。方法用3%FG双上丘注射，逆行标记RGC。5天后做视网膜定向铺片，在荧光显微镜下距离视乳头中心上下左右各2mm拍摄照片。利用计算机图像分析系统做RGC计数。结果右眼RGC单位面积数量472.9±54.13，左眼RGC单位面积数量471.5±52.54。双眼RGC单位面积数量相比差异无显著性（P>0.05）。视网膜血管自视盘发出呈放射状，血管走行区无标记细胞。距视盘2mm始RGC分布较致密，视网膜周边部细胞分布较为稀疏。结论用荧光金逆行标记上丘方法来标记RGC，是实验条件下研究RGC数量动态变化的可靠、有效方法。

　　【关键词】视网膜神经节细胞;荧光金

　　Retinal ganglion cells retrograde labelled by injection of fluorogold

　　LI Yue-hua，MA Ke，Xu Liang.

　　Department of Ophthalmology,Beijing Chaoyang Hospital,Beijing 100020，China

　　【Abstract】 Objective Retinal ganglion cells (RGC) were retrograde labeled by injection of 3% fluorogold into both side of superior colliculus to observe the numbers and distribution of RGC .Four photographs were taken from every quadrant of the retina 2mm from the center of optic disc. Retinal ganglion cells were quantitatively analyzed by computer.Methods To identify RGC,we applied the 3%fluorogold to the superior colliculi.The retinal were examined through a fluorescence microscope after 5 days,four photographs were taken from every quadrant of the retina 2mm from the center of optic disc. Retinal ganglion cells were quantitatively analyzed by computer.Results The numbers of RGC were not significantly different between two groups. The numbers of right eye was 472.9±54.13.The numbers of left eye was 471.5±52.54.Conclusion The method that retinal ganglion cells (RGC) retrograde labeled by injection of fluorogold is reliable and effective.

　　【Key words】 retinal ganglion cells;fluorogold

视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGC）的慢性进行性丢失是青光眼最主要的病理生理学特征。高眼压、缺血等原发性损伤首先引起一部分RGC的丢失，丢失的节细胞产生出许多毒性物质，使其周围RGC的生存环境恶化，细胞膜离子通透性增加，线粒体膜遭受损害，致使细胞进入凋亡程序，导致细胞丢失［1］。因此准确的RGC计数是研究青光眼发病机制及视神经保护治疗的关键指标。该实验将荧光金（flurogold,FG）注射于SD大鼠上丘，观察到被FG逆行标记的RGC，以及SD大鼠RGC的数目及分布。

　　1 材料与方法

　　1.1 试剂与器械荧光金（荧光金公司，美国），脑立体定位仪900型（David Kopf仪器公司，美国），荧光显微镜（AH-2，奥林巴斯公司，日本），联想Mustek扫描仪。

　　1.2 实验动物 Sprague-Dawley大鼠10只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。雄性，重量200～240g,裂隙灯检查大鼠前节，包括角膜、前房、虹膜和晶状体无异常改变。Mydrine散瞳，检眼镜观察眼底，包括视盘、眼底血管及部分视网膜无异常改变者。实验动物在12h光照/12h黑暗的条件下饲养。

　　1.3 逆行标记采用双上丘注射法逆行标记RGC。大鼠腹腔注射盐酸氯胺酮与地西泮注射液的等量混合液3ml/kg进行麻醉，将其固定在脑立体定位仪上，0.5%碘伏消毒皮肤，于正中切开皮肤向下分离达颅骨。牙科钻钻开颅骨相应部位，用微量注射器吸取3%FG（溶于0.9%生理盐水中），每侧上丘注射两点（前囟后5.9 和 6.4mm，旁开1.4mm，深4.0mm），每点注射1.5μl，留针5min。

　　1.4 视网膜定向铺片实验第5天，实验动物在深麻醉下，于上方12点处做球结膜缝线标记，立即取出眼球固定于4%多聚甲醛磷酸缓冲液中2h。沿角膜缘后0.5mm剪开眼球，去除角膜和晶状体，分离视网膜并将其定向平铺，空气中自然干燥，市售无色指甲油封片。

　　1.5 荧光照片RGC计数在荧光显微镜下使用V波段荧光激发，距视盘中心2mm上下左右各拍摄照片1张，照片放大倍数125×，分别代表上、下、左、右四个象限的RGC数量。

　　1.6 图像分析使用联想Mustek扫描仪将照片以100dpi扫入计算机，使用彩色颗粒分析软件（CPAS）进行节细胞计数，将上、下、左、右4张照片节细胞数量累加，代表该眼节细胞单位面积数量。

　　1.7 统计学方法使用SPSS for Windows 10.0统计软件包，采用配对t检验，P<0.05差异具有显著性，P<0.01差异具有非常显著性。

　　2 结果

　　2.1 FG标记的RGC的形态在FG标记后5天，大鼠视网膜铺片观察到标记的RGC细胞质中荧光均匀，边界清晰，有些细胞可见有荧光充盈的细胞突起，细胞外无荧光染料渗漏（见图1）。
　　2.2 RGC计数及分布双眼RGC单位面积数量见表1。两眼相比较差异无显著性（P>0.05）。视网膜血管自视盘发出呈放射状，血管走行区无标记细胞。距视盘2mm始RGC分布较致密，视网膜周边部细胞分布较为稀疏（见图2）。但细胞内荧光仍较明显。
　　表1 双眼RGC单位面积数量　略
　　3 讨论

　　利用轴浆流逆向输送的特点，在颅内RGC投射的核团上丘、外侧膝状体［2］、视神经断端近眼球一侧放置辣根过氧化物酶或Diamidido Yellow，FG(Fluorogold),Evan Blue,Fluoro-Ruby(FR)［ 2～5］等各种荧光物质，通过逆向轴浆流将这些物质带到RGC胞体内，产生特定的染色效果，标记出RGC，而RGC层中的其他细胞则不能着色。而HRP参与细胞代谢，不能在细胞内长期存留。某些示踪剂如快蓝、核黄等，易于从标记细胞内扩散到周围组织，且照射时褪色较快，即使保存在低温、避光条件下，仍不能长期保存。另外应用传统的组织化学技术无法将RGC与视网膜内其他神经元严格区分，尤其是与移位的无长突细胞鉴别。利用轴浆流逆向输送的特点，目前多用荧光金逆行标记上丘方法来标记RGC，是实验条件下研究RGC数量动态变化的可靠、有效方法。
　　荧光金在紫外线照射下，其激发光波长323nm,发射光波长为408nm，标记的RGC呈金黄色强荧光，能标记细胞质，而细胞核不着色，能很好显示树突分支，细胞外无荧光染料渗漏，不易扩散，与周围组织分界清晰，除RGC层外，其余各层中均无荧光标记的细胞。Selles-Navarro I［6］等研究发现应用荧光金行上丘逆行标记RGC后，细胞质内荧光金的存在不超过3周，标记后12天、14天、21天与标记后37天有明显差异。随时间进展荧光金可能丢失荧光或被代谢［7］。该实验于动物处死前5天行荧光金逆行标记上丘，标记的RGC呈金黄色强荧光，各象限均匀。通过逆行标记RGC可以记录它的累积丢失，比通过凋亡标记（如TUNEL染色）更好，通过凋亡标记在一定的时间只能看到少量细胞［8］。此标记方法广泛应用于RGC的发生和凋亡［9］、视网膜缺血［6］、视神经横断、视神经再生的研究。
该实验的标记方法为两点法双侧上丘注射，因为有95%以上的大鼠RGC投射到上丘［10］，10%左右的RGC的轴突投射到同侧外侧膝状体。因此，采用对侧上丘注射标记单眼RGC的方法并不可靠，至少有10%的RGC不被标记。上丘注射法还包括一点法［10］、三点法［11］。以往我们也采取过每侧上丘注射一点的标记方法，发现这种方法能够成功标记RGC的比率比较低，而且对注射精度要求高，注射点必须位于上丘中心（前囟后5.3mm中线外2mm,深4.5mm）。如果注射偏离上丘中心位置，将导致视网膜RGC标记的不均匀。改用双侧上丘两点注射法标记出的RGC分布均匀，对视网膜各象限RGC数的统计学检验差异无显著性。另外发现RGC数量从中心到视网膜周边并没有大幅度衰减。三点标记法耗时长、增加动物感染机会、损伤较两点法重。比较上丘一点注射法、两点注射法和多点注射法，认为两点注射法效率高，标记良好，有比较好的稳定性。
实验证明用荧光金逆行标记上丘方法来标记RGC，是实验条件下研究RGC数量动态变化的可靠、有效方法。　　
【参考文献】
1 Schwartz M, Belkin M, Yoles E, et al. Potential treatment modalities for glaucomatous neuropathy: neuroprotection and neuroregeneration . J Glaucoma, 1996，5: 427-432.
2 Kondo Y, Takada M, Honda Y, et al .Bilateral projections of single retinal ganglion cells to the lateral geniculate nuclei and superior colliculi in the albino rat. Brain Res, 1993，608(2): 204-215.
3 Farid Ahmed AK, Dong K, Setsu T, et al. Correlation between different types of retinal ganglion cells and their projection pattern in the albino rat. Brain Res, 1996，706(1): 163-168.
4 Farid Ahmed AK,Dong K, Hanna-Georges FB, et al. Retrograde double-labeling study of retinal ganglion cells from the ipsilateral VLGN and SC in the albino rat. Neurosci Lett, 1998，244(1): 47-51.
5 Levkovitch-Verbin H, Harris-Cerruti C,Groner Y, et al. RGC death in mice after optic nerne crush injury: oxidative stress and neuroprotection. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2000，41(13): 4169-4174.
6 Selles-Navarro I, Villegas-Perez MP, Salvador-Silva M, et al. Retinal ganglion cell death after different transient periods of pressure-induced ischemia and survival intervals. A quantitative in vivo study. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1996，37(10): 2002-2014.
7 G mez Ram rez AM,Villegas-p rez MP,Salvador M，et al.Use the flrorescent tracer fluorogold to identify the motoneuron population of the abducens nucleus:a quantitative in vivo study . Invest Ophthalmol Vis Sci, 1995， 36: 687.
8 Garcia-Valenzuela E,Shareef S,Walsh J，et al.Programmed cell death of retinal ganglion cells during experimental glaucoma.Exp Eye Res, 1995，61: 33-44.
9 Lagreze WA, Knorle R, Bach M, et al. Memantine is neuroprotective in a rat model of pressure-induced retinal ischemia. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1998, 39(6): 1063-1066.
10 Levkovitch-Verbin H,Harris-Cerruti C,Groner Y,et al.RGC death in mice after optic nerve crush injury:oxidative stress and neuroprotection. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2000,41(13): 4169-4174.
11 Yoles E,Muller S,Schwartz M. NMDA-Receptor antagonist protects neurons from secondary degeneration after partial optic nerve crush.J Neurotrauma, 1997,14(9): 665-675.

2006-07-28 10:35

投票 1
收藏 5
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 【分享】中山大学考博资料

楼主

mickeyzq

公共卫生与预防医学

丁香园中级站友

4楼

Selles-Navarro I［6］等研究发现应用荧光金行上丘逆行标记RGC后，细胞质内荧光金的存在不超过3周，标记后12天、14天、21天与标记后37天有明显差异。随时间进展荧光金可能丢失荧光或被代谢［7］。

这句话对我会有帮助，谢谢！

2006-07-29 12:43

投票
收藏
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 丁香热议——三甲医院被收购后“内斗不休”，院长自杀！

神经生物

【求助】示踪剂——荧光金在体内能持续多长时间不衰减而被荧光显微镜检测到？

提示

丁香园旗下网站

关于丁香园

官方链接

神经生物

分享到：

微信扫一扫

【求助】示踪剂——荧光金在体内能持续多长时间不衰减而被荧光显微镜检测到？

微信扫一扫

微信扫一扫

微信扫一扫

微信扫一扫

提示

丁香园旗下网站

关于丁香园

官方链接