请教一个关于载体去磷酸化和连接的方案
各位师兄师姐们不要见笑,俺刚开始做分生实验没有经验,用ECORI把载体PCDAN3单酶切后,和用ECORI单酶切后的目的基因连接,无奈载体培养基上长的全是PCDAN3自连的克隆,查阅分子克隆建议行载体去磷酸化再和目的基因连接,但具体步骤不祥,还是无从做起。请教那位师兄师姐能提供去磷酸化的具体步骤,还有和目的基因连接的步骤,各组分的比例。小弟在此先谢过了!
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2658
各位师兄师姐们不要见笑,俺刚开始做分生实验没有经验,用ECORI把载体PCDAN3单酶切后,和用ECORI单酶切后的目的基因连接,无奈载体培养基上长的全是PCDAN3自连的克隆,查阅分子克隆建议行载体去磷酸化再和目的基因连接,但具体步骤不祥,还是无从做起。请教那位师兄师姐能提供去磷酸化的具体步骤,还有和目的基因连接的步骤,各组分的比例。小弟在此先谢过了!
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