[一块砖头]大肠杆菌表达之四步曲
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我个人认为大肠杆菌表达研究有四重境界
1）初次尝试扫盲篇
第一次接触原核表达系统，心理有些忐忑不安，仔细阅读载体使用手册，小心翼翼地构建质粒，转化，诱导，迫不及待地走完SDS-PAGE，染色、脱色，望眼欲穿地看着那些兰色的条带，经常遭到当头一棒。
2）乱棍打枣入门篇
开始总结一些规律，那就是尽可能收集各种不同特点和诱导方式的载体和各种特点的宿主菌。融合表达，非融合表达，温度诱导，IPTG诱导，Arabose诱导......这个阶段有时觉得自己很富有，手里有各种棍子，抡出时感觉经常很好，虽然结果不总是那么争气，但经常可以打落几颗枣子。
3）系统优化中级篇
开始研究自己手里的棍子和别人手里的棍子，开始制造工具（这是人类的特点）。密码子优化，mRNA5'UTR优化是经常考虑的因素。这个时期的特点还有经常发现别人的综述写得很好，自己手里的棍子打出去时开始带有目的性，但仍然喜欢乱棍战术。
4）自成一体高手篇
喜欢把载体看成一堆零件，有自己的表达系统和风格，根据基因的特点和研究目的使用合理的战术，抡棍子的次数减少，捡到的枣子渐多，用自己制造的工具从事创造性的劳动。
为了纪念我在丁香园的第1000贴，特抛出一块砖头，博一笑！
1）初次尝试扫盲篇
第一次接触原核表达系统，心理有些忐忑不安，仔细阅读载体使用手册，小心翼翼地构建质粒，转化，诱导，迫不及待地走完SDS-PAGE，染色、脱色，望眼欲穿地看着那些兰色的条带，经常遭到当头一棒。
2）乱棍打枣入门篇
开始总结一些规律，那就是尽可能收集各种不同特点和诱导方式的载体和各种特点的宿主菌。融合表达，非融合表达，温度诱导，IPTG诱导，Arabose诱导......这个阶段有时觉得自己很富有，手里有各种棍子，抡出时感觉经常很好，虽然结果不总是那么争气，但经常可以打落几颗枣子。
3）系统优化中级篇
开始研究自己手里的棍子和别人手里的棍子，开始制造工具（这是人类的特点）。密码子优化，mRNA5'UTR优化是经常考虑的因素。这个时期的特点还有经常发现别人的综述写得很好，自己手里的棍子打出去时开始带有目的性，但仍然喜欢乱棍战术。
4）自成一体高手篇
喜欢把载体看成一堆零件，有自己的表达系统和风格，根据基因的特点和研究目的使用合理的战术，抡棍子的次数减少，捡到的枣子渐多，用自己制造的工具从事创造性的劳动。
为了纪念我在丁香园的第1000贴，特抛出一块砖头，博一笑！
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