请教pEGFP-N1转染问题,急!
现遇到以下问题:
用Invitrogen的Lipofectamine2000进行转染,转染操作按照说明书进行。设对照空载体pEGFP-N1组,但转染后发现对照空载体pEGFP-N1组也有较多细胞凋亡、死亡,另设只加入Lipofectamine2000的对照孔,细胞生长较好,说明不是脂质体对细胞的毒性。由于pEGFP-N1表达绿色荧光蛋白,对细胞应该无毒性作用,问题:
(1) 不知是否转入外源DNA纯度不够就会对细胞有毒性?我是用QIAGEN-Kit提的质粒,用紫外分光光度法测定质粒纯度OD260/OD280=1.67,纯度可以吗?
(2)转入量是按DNA(ug):Lipofectamine 2000(ul)=1:2转入0.8*105cell,是用紫外分光光度法测定质粒浓度,是否不够准确?转入DNA量过大是否就会有毒性作用?
请各位高手指教,多谢!