dxy logo
首页丁香园病例库全部版块
搜索
登录

请教pEGFP-N1转染问题,急!

最后编辑于 2022-10-09 · IP 广东广东
2655 浏览
这个帖子发布于 21 年零 221 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
将带有外源基因的质粒pEGFP-N1,转入肿瘤细胞,表达外源基因蛋白-绿色荧光融合蛋白,外源基因编码的蛋白可提高细胞凋亡敏感性。
现遇到以下问题:
用Invitrogen的Lipofectamine2000进行转染,转染操作按照说明书进行。设对照空载体pEGFP-N1组,但转染后发现对照空载体pEGFP-N1组也有较多细胞凋亡、死亡,另设只加入Lipofectamine2000的对照孔,细胞生长较好,说明不是脂质体对细胞的毒性。由于pEGFP-N1表达绿色荧光蛋白,对细胞应该无毒性作用,问题:
(1) 不知是否转入外源DNA纯度不够就会对细胞有毒性?我是用QIAGEN-Kit提的质粒,用紫外分光光度法测定质粒纯度OD260/OD280=1.67,纯度可以吗?
(2)转入量是按DNA(ug):Lipofectamine 2000(ul)=1:2转入0.8*105cell,是用紫外分光光度法测定质粒浓度,是否不够准确?转入DNA量过大是否就会有毒性作用?

请各位高手指教,多谢!





5 1 点赞

全部讨论(0)

默认最新
avatar
5
分享帖子
share-weibo分享到微博
share-weibo分享到微信
认证
返回顶部