最近做RACE 遇到一些问题，希望高手指点
发布于 2003-11-17 · 浏览 1395 · IP 重庆重庆
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最近正在延伸两个EST 的全长。买了Clontech的反转录酶和PCR advantage polymerase mix, 委托国内公司合成有关引物，组合kit。
感觉 1.此方法不太稳定，不知何原因 2.自己设计几对引物，Omiga2.0分析无明显差异，但是有些扩增效果较好，有些有较高的backgroud，提高退火温度，降低模板浓度均不能提高特异性, 不知引物设计有什么规律？3. 虽然有些扩增成功，但是大片段的产量较低。用普通PCR 扩增PCR 产物效果较差，不知有何办法提高产量。
4.有一条引物扩增出一条约500bp, 但是小于预期值，不知怎么回事，希望各位高手指点。 谢谢！
感觉 1.此方法不太稳定，不知何原因 2.自己设计几对引物，Omiga2.0分析无明显差异，但是有些扩增效果较好，有些有较高的backgroud，提高退火温度，降低模板浓度均不能提高特异性, 不知引物设计有什么规律？3. 虽然有些扩增成功，但是大片段的产量较低。用普通PCR 扩增PCR 产物效果较差，不知有何办法提高产量。
4.有一条引物扩增出一条约500bp, 但是小于预期值，不知怎么回事，希望各位高手指点。 谢谢！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1395
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