【原创】流式细胞技术-ROS检测
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该流程将使用到由碧云天生物技术提供的活性氧检测试剂盒，由安捷伦生物提供的NovoCyte流式细胞仪，以及乳腺癌MDA-MB-231细胞株。
铺板加药可参考我的流式凋亡帖子【原创】流式细胞技术-细胞凋亡。与凋亡不同，六孔板上可设置空白、浓度1、浓度2，各两个孔，也可根据实验安排各孔位。
下面直接从探针孵育开始介绍：
细胞处理到流式管后，使用PBS离心洗涤三次。1：1000稀释（推荐使用无血清无酚红的培养基）DCFH-DA 探针（可使用15ml离心管，混匀后装实验服口袋里避光），每管加入1ml稀释后的探针后置于培养箱中孵育20min，每3-5min手动混匀一次（试剂盒中提供阳性对照物rosup，可根据需要设置阳性对照）。孵育结束后使用无FBS的培养基离心洗涤三次，加入300μl的PBS重悬细胞，置于冰上即可上机检测。
参数：FSC,SSC,FITC.50000事件,100μl,低速。
1、空白对照：点密度图，柱状图。FSC-SSC用于圈门，并设置各图坐标如下：
2、实验组：即加药组。通过图层叠加，我们可以看到从ck，浓度1到浓度2，ROS产量升高。Mean值代表平均荧光强度，是ROS产量的最终指标。
以上。
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