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【求助】Western blot的条带中间淡的几乎断掉（或哑铃状、纺锤状）的样子是什么原因？要怎么改进呢？

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楼主

Linda_dentist

口腔修复科

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1楼

这个帖子发布于3年零86天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

问题已解决悬赏丁当:2

做的是LC3B、p62和Beclin1的WB，但是不管做哪个指标，条带都会呈现中间明显比两头淡，有的几乎看起来像是断掉一般，要调整曝光强度，才勉强连起来，而且就算连起来了也会有明显哑铃状，大家有遇到过这种问题吗？是什么原因？要怎么改进呢？？？

ps：图上是同样的样本上样的，只是从左到右的上样量依次减少，分别为40、35、30、25、20、15、10、5ug

电泳：90v 30min；120v 1h；

转膜：110v 1h；

封闭用碧云天封闭液；

抗体用abcam；

凝胶用10%和12%的

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2017-10-30 16:35 浏览 : 8974 回复 : 12

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Linda339656099 编辑于 2017-10-30 16:40

• 大家见过从患者体内取出过哪些异物？

楼主

Linda_dentist

口腔修复科

入门站友

2楼

电泳：90v 30min；120v 1h；

转膜：110v 1h；

封闭用碧云天封闭液；

抗体用abcam；

2017-10-30 16:37

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• 医院试工害怕被「白嫖」怎么办？究竟去还是不去？

美润橙子

病理科

入门站友

3楼

满意答案

1.胶凝固后不均一，分离胶放1.5h

2.样品中有没有杂质

2017-10-30 19:08

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• 【规培笔记128】—工作报告偶遇，颅脑MR，据说工作中很罕见——肾性脑病！

楼主

Linda_dentist

口腔修复科

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4楼

秋田雨雀
1.胶凝固后不均一，分离胶放1.5h
2.样品中有没有杂质

样品我是裂解后4度孵育40min，之后4度 12000g 离心5min，然后取上清液，加Loading buffer后煮沸，分装后-80度保存。。

2017-10-30 20:38

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• （原创）血钠183mmol/L的老年人急救处理？

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