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蛋白质和糖学

关注今日:10 | 主题:441447
论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  Western Blot/IP
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【求助】Western blot的条带中间淡的几乎断掉(或哑铃状、纺锤状)的样子是什么原因?要怎么改进呢?

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楼主 Linda_dentist
Linda_dentist
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这个帖子发布于3年零86天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:2

做的是LC3B、p62和Beclin1的WB,但是不管做哪个指标,条带都会呈现中间明显比两头淡,有的几乎看起来像是断掉一般,要调整曝光强度,才勉强连起来,而且就算连起来了也会有明显哑铃状,大家有遇到过这种问题吗?是什么原因?要怎么改进呢???


ps:图上是同样的样本上样的,只是从左到右的上样量依次减少,分别为40、35、30、25、20、15、10、5ug


电泳:90v 30min;120v 1h;

转膜:110v 1h;

封闭用碧云天封闭液;

抗体用abcam;

凝胶用10%和12%的   



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2017-10-30 16:35 浏览 : 8974 回复 : 12
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Linda339656099 编辑于 2017-10-30 16:40
  • • 大家见过从患者体内取出过哪些异物?
楼主 Linda_dentist
Linda_dentist
口腔修复科
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电泳:90v 30min;120v 1h;

转膜:110v 1h;

封闭用碧云天封闭液;

抗体用abcam;



2017-10-30 16:37
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美润橙子
美润橙子
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满意答案

1.胶凝固后不均一,分离胶放1.5h

2.样品中有没有杂质

2017-10-30 19:08
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楼主 Linda_dentist
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秋田雨雀

1.胶凝固后不均一,分离胶放1.5h

2.样品中有没有杂质

样品我是裂解后4度孵育40min,之后4度 12000g 离心5min,然后取上清液,加Loading buffer后煮沸,分装后-80度保存。。

2017-10-30 20:38
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