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细胞学与信号转导

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论坛首页  >  细胞生物学和信号转导版
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WB实验小白,条带就是跑不出来,求助。

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楼主 可苦可乐A88E
可苦可乐A88E
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细胞样本,RIPA强裂解液低温裂解,BCA测蛋白浓度按上样20ug计算上样体积大概在5-10ul,用的4×的上样缓冲液,100℃变性5min,10%,12孔的胶,每孔上样20ul,100v恒压电泳到溴酚蓝到达底部,低温转NC膜100v,1h。丽春红染色,之后洗膜,封闭液封闭1h,过夜敷一抗,敷荧光二抗,然后除了marker啥也看不到




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2019-09-19 16:08 来自 Android客户端 浏览 : 1587 回复 : 13
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感觉是抗体的问题,操作就算有问题也不可能一点信号都没有,而且内参都发不出来,我觉得二抗出问题的可能比较大。因为我之前做的时候也是一张白板,换了二抗之后就发的很好了
2019-09-20 11:17 来自 Android客户端
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楼主 可苦可乐A88E
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Austin1314
感觉是抗体的问题,操作就算有问题也不可能一点信号都没有,而且内参都发不出来,我觉得二抗出问题的可能比较大。因为我之前做的时候也是一张白板,换了二抗之后就发的很好了
请问您用的是哪种二抗呀?荧光二抗还是HRP呢?丽春红染色之后能看到的条带特别浅是为什么呢?42kda-68Kda的蛋白转膜可以一起转吗?大概多久呢,我真是刚接触这个实验,不会的特别多,问了好多问题,希望您不要介意谢谢😊
2019-09-21 10:08 来自 Android客户端
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可苦可乐A88E
请问您用的是哪种二抗呀?荧光二抗还是HRP呢?丽春红染色之后能看到的条带特别浅是为什么呢?42kda-68Kda的蛋白转膜可以一起转吗?大概多久呢,我真是刚接触这个实验,不会的特别多,问了好多问题,希望您不要介意谢谢😊

42kda-68Kda可以一起转的,我们一般是100v, 90min;

也有可能是你样品制备的问题,100℃建议煮10-15min; 有阳性样品的话可以一起跑看看;

2019-09-22 16:52
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