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核酸技术

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质粒点突变 转化后不长菌落

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楼主 奥黛丽赫本824
奥黛丽赫本824
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这个帖子发布于2年零244天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

9Kbp的质粒用突变引物PCR后 电泳切下目的条带,后胶回收,用Dpn1消化后纯化后,质粒浓度有60mg/ul.用纯化后的质粒1ul跑电泳可以看见清晰的单一条带.但是取50ul感受态,1ul质粒转化就不长菌落。已确定抗生选用正确。使用过化转和电转两种方法重复3次都不长菌落。化转感受态使用过:DH5a, Top10,Jum109.都不长菌落。请问各位大神我该怎么改进。谢谢🙏

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2018-05-23 11:07 来自 iPhone/iPad客户端 浏览 : 3965 回复 : 10
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Try to do ethanol precipitation of Dpn digested and gel purified PCR products before transformation again. 


2018-05-23 13:21
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60mg/ul.....NB了。。。

另外,你转化的是线性的质粒么?

2018-05-23 14:43
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楼主 奥黛丽赫本824
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kangaroo0513

60mg/ul.....NB了。。。

另外,你转化的是线性的质粒么?



不好意思,微克/毫升,写错了


2018-05-23 15:41 来自 iPhone/iPad客户端
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