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质粒点突变转化后不长菌落

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楼主

奥黛丽赫本824

入门站友

1楼

9Kbp的质粒用突变引物PCR后电泳切下目的条带，后胶回收，用Dpn1消化后纯化后,质粒浓度有60mg/ul.用纯化后的质粒1ul跑电泳可以看见清晰的单一条带.但是取50ul感受态，1ul质粒转化就不长菌落。已确定抗生选用正确。使用过化转和电转两种方法重复3次都不长菌落。化转感受态使用过：DH5a, Top10,Jum109.都不长菌落。请问各位大神我该怎么改进。谢谢🙏

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2018-05-23 11:07 来自 iPhone/iPad客户端浏览 : 3144 回复 : 10

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铁杆站友

2楼

Try to do ethanol precipitation of Dpn digested and gel purified PCR products before transformation again.

2018-05-23 13:21

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• 左大腿部外伤1例

常驻站友

3楼

60mg/ul.....NB了。。。

另外，你转化的是线性的质粒么？

2018-05-23 14:43

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楼主

奥黛丽赫本824

入门站友

4楼

kangaroo0513
60mg/ul.....NB了。。。
另外，你转化的是线性的质粒么？

不好意思，微克/毫升，写错了

2018-05-23 15:41 来自 iPhone/iPad客户端

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