transwell 细胞侵袭 详细记录

在网上下载了一份protocol，然而很多细节都不清楚，网上查阅纠结了一个星期，也没有太多进展。正好今天解决了一些疑问，希望我的记录帖子为后来战友提供一些参考。

我下载的protocol: http://www.bioon.com/experiment/cellular8/275769.shtml

出于成本节约，选择了自己进行基质胶包被。战友们其实可以选择已包被好基质胶的小室，然后直接上手开始试验。

材料购买：1、BD Falcon 353097 24孔细胞培养池半透明PET膜8.0um孔径 48个/箱

                  2、Corning® Matrigel® Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 5 mL

                  3.BSA（按需，后面会讲） 血清培养基（我的细胞系需1640，大家根据自己的细胞系选择，这个不需要赘述）

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如何包被，如何稀释，纠结了好久啊啊啊

详细询问了技术，细节如下：

大家购买的matrigel小瓶上有一个LOT，在官网上输入序号查看，不同批次浓度不同。eg：我的matrigel浓度是9.6mg/ml.

Corning给的常规建议是，将matrigel稀释至200-300ug/ml。提醒：根据细胞系不同侵袭能力，浓度肯定是不一样的。建议预实验设置浓度梯度，摸索条件。

稀释液：（我的）无血清1640培养基。

very important：matrigel是-20℃保存的，所以使用前需分装。具体：前一夜-20℃取出，放入冰盒后再放入4℃解冻成液态（保持恒温环境，避免失效）；分装完成放回-20℃保存；以最小使用量分装，尽量保证每解冻一小支就用完。

在分装及实验时需要用到的所有耗材，如离心管、移液吸头等等，均需要提前预冷，并在操作的全程保证低温。

包被稀释液的量：我的小室是24孔板的，所以推荐包被稀释matrigel为每孔100ul。Then, 不是4℃风干啊喂啊喂，放入37℃1-2h。PS：保持湿润，时间到了后是看不到果冻样凝胶的，此时吸去多余液体，不用完全吸干，注意不要碰触底部的膜！

不需要水化（这个我之前也很纠结）~

好了，直接加入细胞悬液了（是否使用BSA，根据自己的细胞状态，如细胞在无血清培养基中状态很差，可加入10g/L BSA；由于我的肿瘤细胞状态还行，所以我没有加）

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操作过程中的具体细节后续跟进。

预祝大家实验顺利！