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蛋白质和糖学

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论坛首页 > 蛋白质和糖学技术讨论版 > Western Blot/IP

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用IP和WB测蛋白质磷酸化水平（4G10抗体），会改变分子量吗？

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楼主

入门站友

1楼

问题已关闭悬赏丁当:2

我测A蛋白的磷酸化水平，先用IP拉下A蛋白，然后用磷酸化抗体（4G10）检测，wb测蛋白A时是70-100之间，IP后再用4G10确是50左右，甚至没剪全，而且70-100之间毫无磷酸化痕迹，这可能吗？而且我IP后也有再WB检测有无A蛋白存在，也显示在70-100之间，就只有敷4G10抗体才显示在50左右，能否证明磷酸化的蛋白就是A蛋白呢？为什么不一样呢？按道理我IP的是A蛋白，再敷4G10显示的应该也是A蛋白的磷酸化水平不是吗？有什么原因呢？

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2019-06-26 10:10 浏览 : 956 回复 : 5

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楼主

入门站友

2楼

有人用过4G10嘛，求解答...

2019-06-26 19:40 来自 iPhone/iPad客户端

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铁杆站友

3楼

4G10抗体检测的蛋白叫啥？有一堆抗体的克隆号是4G10

2019-06-27 07:41

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麦克林托克

铁杆站友

4楼

1、IP后你需要先杂一下A蛋白确定分子量，然后杂4G10

2、IP还可能钓出A蛋白的互作蛋白，所以1必须先做才能确认你4G10的不是A的互作蛋白

3、磷酸化确实会影响分子量大小，但是一般只有几kDa，分子量变化大的要考虑泛素化修饰或降解剪切之类的

2019-06-27 09:07

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