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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  Western Blot/IP
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用IP和WB测蛋白质磷酸化水平(4G10抗体),会改变分子量吗?

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楼主 sherryaDXY
sherryaDXY
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我测A蛋白的磷酸化水平,先用IP拉下A蛋白,然后用磷酸化抗体(4G10)检测,wb测蛋白A时是70-100之间,IP后再用4G10确是50左右,甚至没剪全,而且70-100之间毫无磷酸化痕迹,这可能吗?而且我IP后也有再WB检测有无A蛋白存在,也显示在70-100之间,就只有敷4G10抗体才显示在50左右,能否证明磷酸化的蛋白就是A蛋白呢?为什么不一样呢?按道理我IP的是A蛋白,再敷4G10显示的应该也是A蛋白的磷酸化水平不是吗?有什么原因呢?


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2019-06-26 10:10 浏览 : 1788 回复 : 5
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楼主 sherryaDXY
sherryaDXY
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有人用过4G10嘛,求解答...


2019-06-26 19:40 来自 iPhone/iPad客户端
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4G10抗体检测的蛋白叫啥?有一堆抗体的克隆号是4G10

2019-06-27 07:41
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1、IP后你需要先杂一下A蛋白确定分子量,然后杂4G10

2、IP还可能钓出A蛋白的互作蛋白,所以1必须先做才能确认你4G10的不是A的互作蛋白

3、磷酸化确实会影响分子量大小,但是一般只有几kDa,分子量变化大的要考虑泛素化修饰或降解剪切之类的

2019-06-27 09:07
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