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求助：Huvec细胞用RNAIMAX转染后细胞立即死掉是什么原因？

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楼主

入门站友

1楼

问题已关闭悬赏丁当:5

本人在24孔板接种HUVEC细胞数5x10^4后培养16小时，然后用RNAIMAX转染,先配转染试剂混悬液50ul(1.5ul RNAIMAX+48.5ul opti(稀释液))再配50ul的过表达的microRNA混悬液50ul(1ulmicroRNA mimic+49ul opti)两者配好后混匀，放室温静置10min后，再分别沿着孔壁加到24孔板相应孔100ul(原先已有400ul的不含双抗的完全培养基)，加完摇匀后显微镜下看，细胞死了一大片，甚至有全死光的现象。

上传的图片上周边原本很多细胞的，转染完后就全

死了，速度很快。求助为什么？

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2017-12-16 11:25 浏览 : 651 回复 : 1

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小狐狸的尾巴

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2楼

选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验的影响非常大，可以直接影响实验结论和结果，所以一定选择低毒性的转染试剂，看一个转染试剂毒性是否低，有一个简单的方法，看转染的过程和要求，比如要求的细胞密度越大，说明毒性越大，比如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短，说明毒性越大。之前我师姐给我推荐了RFect小核酸转染试剂，确实低毒性，而且操作简便。实际上，由于培养条件的频繁变化，可能会对细胞表达模式产生影响，对后续的mRNA和蛋白分析也同样产生影响，最终影响实验的可靠性。希望对你有帮助。

2019-04-17 16:15

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