【资源共享】关于3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞的一点心得和体会！！
dachong99 +8 丁当这个帖子发布于 9 年零 221 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人养3T3-L1脂肪细胞已接近半年了，真心本这个细胞虐到了，由一开始的顺风顺水到后来的状况百出，曾经不止一次的打算放弃，但还是由于自己的坚持不懈，终于度过了黎明前的黑暗，迎来了胜利的曙光。所以，我打算把自己的经验分享给正在养和将要养这个细胞的同仁们，希望对你们有所帮助。
首先，我想说的是分化成功的关键就是要买到好的细胞株，这是决定你分化成功最关键的因素！！！首推ATCC的，当然如果经费比较紧张的话，协和细胞库的也可以（我买的就是协和的），不过细胞的代数最好是越低越好，20代以后就能很难分化出来了。一般10代以内的细胞贴壁性差一点，但分化率最高，10代-20代帖壁性好，分化率适中，20代以后就比较难分化出来了。
关于分化液：分为诱导液1和诱导液2两种，诱导液1：1000x IBMX (0.5M): MW=222.25, 0.5M=111mg/ml in DMSO； 1000x Dex (1mM): MW=392.46, 1mM=0.39mg/ml in EtOH；1000000X rosiglitazone（2Mm）胰岛素我用医院直接买的，50ml培养基加320ul；除胰岛素外，以上药品都为sigma的。诱导液2只加胰岛素，也是50ml培养基中加320
ul的医用胰岛素即可；
1、3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成脂肪细胞3T3-L1小鼠成纤维细胞置于含10%FBS的高糖DMEM培养基中，37℃、5%CO2，饱和湿度条件下培养。步骤如下：1）试验时以2.5×104/mL的密度接种细胞于24孔板中（接种于24孔培养板，每孔细胞浓度为1×104个mL-1，每孔体积为600 μl，），待细胞长至80%开始分化；2）用分化液1培养液培养一周左右，直到看见有环状的油滴时，换成诱导液2；3）再用分化液2含10ug/ml胰岛素，10% FBS高糖DMEM培养液培养2天；4）含10% FBS高糖DMEM培养液，每天换液一次；5）8-10天，细胞呈脂肪细胞表型，可看到脂滴；6）14天以后分化率达90%以上的细胞才可以使用。先写这么多，欢迎大家继续探讨！
首先，我想说的是分化成功的关键就是要买到好的细胞株，这是决定你分化成功最关键的因素！！！首推ATCC的，当然如果经费比较紧张的话，协和细胞库的也可以（我买的就是协和的），不过细胞的代数最好是越低越好，20代以后就能很难分化出来了。一般10代以内的细胞贴壁性差一点，但分化率最高，10代-20代帖壁性好，分化率适中，20代以后就比较难分化出来了。
关于分化液：分为诱导液1和诱导液2两种，诱导液1：1000x IBMX (0.5M): MW=222.25, 0.5M=111mg/ml in DMSO； 1000x Dex (1mM): MW=392.46, 1mM=0.39mg/ml in EtOH；1000000X rosiglitazone（2Mm）胰岛素我用医院直接买的，50ml培养基加320ul；除胰岛素外，以上药品都为sigma的。诱导液2只加胰岛素，也是50ml培养基中加320
ul的医用胰岛素即可；
1、3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成脂肪细胞3T3-L1小鼠成纤维细胞置于含10%FBS的高糖DMEM培养基中，37℃、5%CO2，饱和湿度条件下培养。步骤如下：1）试验时以2.5×104/mL的密度接种细胞于24孔板中（接种于24孔培养板，每孔细胞浓度为1×104个mL-1，每孔体积为600 μl，），待细胞长至80%开始分化；2）用分化液1培养液培养一周左右，直到看见有环状的油滴时，换成诱导液2；3）再用分化液2含10ug/ml胰岛素，10% FBS高糖DMEM培养液培养2天；4）含10% FBS高糖DMEM培养液，每天换液一次；5）8-10天，细胞呈脂肪细胞表型，可看到脂滴；6）14天以后分化率达90%以上的细胞才可以使用。先写这么多，欢迎大家继续探讨！
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