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HUVEC transwell 迁移实验

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楼主

入门站友

1楼

问题已关闭悬赏丁当:5

实验步骤：1.加样：上室：无血清培养基饥饿24h的原代HUVEC 5*104/孔，200ul;下室加入750ul含VEGF培养基。2.培养12-16h后4%多聚甲醛固定15min,结晶紫染色15min。拍照发现并无细胞，见下图。可能原因：1.培养时间短，无细胞迁移至膜另一侧；2.细胞未能固定，我用的福尔马林稀释十倍。请各位大神给予指导

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2019-01-18 14:55 浏览 : 3176 回复 : 10

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• 北京法院审理孙文斌故意杀人案，判处被告人孙文斌死刑

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细胞技术版骨干站友

8楼

一般肿瘤细胞需要24-48h才能完成迁移，原代细胞通常迁移能力更弱，所以建议延长实验时间，有条件最好做个梯度预实验，摸下最适迁移时间；另外transwell小室的孔径有大小，太小的话会影响细胞迁移速度，最好自己看下实验细胞直径，选择合适的孔径。

2019-03-05 20:38

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• 丁香热议——手术时开个玩笑，赔了患者两万块！

丁香园版主

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2楼

你这拍的看着像是小室里的细胞，而不是穿过去的细胞；另外似乎细胞也没有染上色

建议进一步调整视野，同时搜搜看别人穿过去的照片是什么样的；

结晶紫染色可以延长至25min左右，PBS清洗干净后，用润湿的棉签抹去小室内细胞

2019-01-18 15:08

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cheff0412 编辑于 2019-01-18 15:15

• 丁香早知道 - 1.15 | 患者丈夫醉酒扬言要杀医，是什么让医生如此彷徨？

楼主

入门站友

3楼

cheff0412
你这拍的看着像是小室里的细胞，而不是穿过去的细胞；另外似乎细胞也没有染上色
建议进一步调整视野，同时搜搜看别人穿过去的照片是什么样的；
结晶紫染色可以延长至25min左右，PBS清洗干净后，用润湿的棉签抹去小室细胞染上色了，

细胞应该染上色了，下图是上室内面没搽干净的细胞，但就是看不到迁移过去的细胞

2019-01-18 15:29

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