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HUVEC transwell 迁移实验

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楼主

入门站友

1楼

这个帖子发布于2年零8天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

问题已关闭悬赏丁当:5

实验步骤：1.加样：上室：无血清培养基饥饿24h的原代HUVEC 5*104/孔，200ul;下室加入750ul含VEGF培养基。2.培养12-16h后4%多聚甲醛固定15min,结晶紫染色15min。拍照发现并无细胞，见下图。可能原因：1.培养时间短，无细胞迁移至膜另一侧；2.细胞未能固定，我用的福尔马林稀释十倍。请各位大神给予指导

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2019-01-18 14:55 浏览 : 5181 回复 : 10

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倚楼听蝉声

丁香园版主

+1 积分
2楼

你这拍的看着像是小室里的细胞，而不是穿过去的细胞；另外似乎细胞也没有染上色

建议进一步调整视野，同时搜搜看别人穿过去的照片是什么样的；

结晶紫染色可以延长至25min左右，PBS清洗干净后，用润湿的棉签抹去小室内细胞

2019-01-18 15:08

投票 1
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cheff0412 编辑于 2019-01-18 15:15

• 【讲座】“医源性”象皮肿，--这类手术，我已经20多年，没有在手术了！

楼主

入门站友

3楼

cheff0412
你这拍的看着像是小室里的细胞，而不是穿过去的细胞；另外似乎细胞也没有染上色
建议进一步调整视野，同时搜搜看别人穿过去的照片是什么样的；
结晶紫染色可以延长至25min左右，PBS清洗干净后，用润湿的棉签抹去小室细胞染上色了，

细胞应该染上色了，下图是上室内面没搽干净的细胞，但就是看不到迁移过去的细胞

2019-01-18 15:29

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• 我可能是试工里最主动最傻的那一个

倚楼听蝉声

丁香园版主

+10 丁当
4楼

zk1986
细胞应该染上色了，下图是上室内面没搽干净的细胞，但就是看不到迁移过去的细胞

你这张图和一楼的图是同一个视野吗

如果是没有穿过去的话，建议延长时间至48h，下室加含20% FBS 的培养基

2019-01-18 19:41

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