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细胞技术

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HUVEC transwell 迁移实验

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楼主 zk1986
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这个帖子发布于2年零8天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已关闭悬赏丁当:5

实验步骤:1.加样:上室:无血清培养基饥饿24h的原代HUVEC 5*104/孔,200ul;下室加入750ul含VEGF培养基。2.培养12-16h后4%多聚甲醛固定15min,结晶紫染色15min。拍照发现并无细胞,见下图。可能原因:1.培养时间短,无细胞迁移至膜另一侧;2.细胞未能固定,我用的福尔马林稀释十倍。请各位大神给予指导


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2019-01-18 14:55 浏览 : 5181 回复 : 10
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你这拍的看着像是小室里的细胞,而不是穿过去的细胞;另外似乎细胞也没有染上色

建议进一步调整视野,同时搜搜看别人穿过去的照片是什么样的;

结晶紫染色可以延长至25min左右,PBS清洗干净后,用润湿的棉签抹去小室内细胞

2019-01-18 15:08
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cheff0412 编辑于 2019-01-18 15:15
  • • 【讲座】“医源性”象皮肿,--这类手术,我已经20多年,没有在手术了!
楼主 zk1986
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  • 3楼
cheff0412

你这拍的看着像是小室里的细胞,而不是穿过去的细胞;另外似乎细胞也没有染上色

建议进一步调整视野,同时搜搜看别人穿过去的照片是什么样的;

结晶紫染色可以延长至25min左右,PBS清洗干净后,用润湿的棉签抹去小室细胞染上色了,


细胞应该染上色了,下图是上室内面没搽干净的细胞,但就是看不到迁移过去的细胞


2019-01-18 15:29
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zk1986

细胞应该染上色了,下图是上室内面没搽干净的细胞,但就是看不到迁移过去的细胞



你这张图和一楼的图是同一个视野吗

如果是没有穿过去的话,建议延长时间至48h, 下室加含20% FBS 的培养基

2019-01-18 19:41
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