分子type：单抗；pI：8.2

缓冲液pH及电导如下：

EQ buffer：pH7.3-7.4， 电导15 mS/cm，单价盐体系

Unbounding wash：EQ buffer

Wash1：pH 5.5，电导：85 mS/cm，单价盐体系

Wash2：pH 5.5，电导：4 mS/cm，单价盐体系

Elution：pH 3.5，电导：0.4 mS/cm，单价盐体系

RT：5min

相关数据汇总

疑惑点：

1.检测 Titer所用柱子为poros A 20，上文中protein A所用柱子为MabSelect SuRe，载量未到20 mg/mL，收率极低！！比如实验3，流穿液里面仍能测量到titer，但为什么MabSelect SuRe捕获不了。

2.洗脱液的pH大概为4.5左右，调节至pH5.5后，样品变浑浊，无论是离心还是用0.2um filter过滤，过滤后浓度将为原来洗脱液的1/2.

其他尝试点：

1 .已经尝试过在load样品里面加入高盐至电导约80 mS/cm进行上样，填料prism A，收率仍为30%左右，此时经过pH调节的洗脱液里面的SEC主峰保留时间向后移动0.8min，对应为标准品的片段出峰位置

2.采用matrix 的聚甲基丙烯酸甲酯的填料，载量16 mg/mL, 收率也没有改变。

请各位大神指导！！!

表格单位确认下没有标错？ 

请问您对哪个单位有疑问？

1、Poros A/20 与Mabselect 系列配基还是有差异的，存在PoroA 能挂柱 Mab系列挂不住，Sure Sure Lx PrismA配基也有差别，结合域也有差异。 

没有考虑配基的问题，考虑了基架不一致，尝试了聚甲基丙烯酸甲酯基架系列的填料，没有改善。请问pros A 20和mab系列的配基不同点在哪里？

Protein G HP 是没有穿透？ 那么还是关注下结合域。  类型是G4? 

Protein G HP没有测流穿液的titer，不是没有穿透，蛋白是IGg1.

2、收率低还是在于沉淀。 Elution 电导太低- -基本无缓冲能力，抗体不稳定。建议洗脱剂增加至20mM，同时增加稳定剂，可尝试精氨酸。

洗脱液并没有浑浊，pH大概在4.5，调节样品的pH至5.5时，浑浊产生，过滤后测定浓度，浓度降低并且降低幅度很大。洗脱液的浓度在50mM，已打算尝试精氨酸。

期待您的回复！