急求：亲和层析收率低的原因

分子type：单抗；pI：8.2

缓冲液pH及电导如下：

EQ buffer：pH7.3-7.4， 电导15 mS/cm，单价盐体系

Unbounding wash：EQ buffer

Wash1：pH 5.5，电导：85 mS/cm，单价盐体系

Wash2：pH 5.5，电导：4 mS/cm，单价盐体系

Elution：pH 3.5，电导：0.4 mS/cm，单价盐体系

RT：5min

相关数据汇总

疑惑点：

1.检测 Titer所用柱子为poros A 20，上文中protein A所用柱子为MabSelect SuRe，载量未到20 mg/mL，收率极低！！比如实验3，流穿液里面仍能测量到titer，但为什么MabSelect SuRe捕获不了。

2.洗脱液的pH大概为4.5左右，调节至pH5.5后，样品变浑浊，无论是离心还是用0.2um filter过滤，过滤后浓度将为原来洗脱液的1/2.

其他尝试点：

1 .已经尝试过在load样品里面加入高盐至电导约80 mS/cm进行上样，填料prism A，收率仍为30%左右，此时经过pH调节的洗脱液里面的SEC主峰保留时间向后移动0.8min，对应为标准品的片段出峰位置

2.采用matrix 的聚甲基丙烯酸甲酯的填料，载量16 mg/mL, 收率也没有改变。

请各位大神指导！！!