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生物制药

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能跟我说说GS系统的吗?CHO细胞做GS系统,到底用什么细胞做的,CHOK1还是CHO_S.有人尝试做过吗

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楼主 云亦醉柔情
云亦醉柔情
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这个帖子发布于2年零188天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
有人用Cripr cas9做过吗,选择什么细胞做呢,CHO细胞系有哪些啊,具体用途
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2017-06-08 20:54 来自 iPhone/iPad客户端 浏览 : 21754 回复 : 39
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laorentou
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关于CHO细胞系的历史及分类可以看看这篇文献,对CHO细胞延伸出的几个亚系会有一些简单的了解。

这几年各个公司在CHO细胞上又做了GS和DHFR以及FUT8基因敲除的细胞系,有Lonza,Sigma等等分别用了不同的敲除技术,现在也有用Cas9技术敲除的。

现在主流大概有3种,CHOK1、DG44、CHOS,用的最多的应该是CHOK1这个亚系吧。再附上一篇关于GS筛选系统的介绍,其实GS系统筛选到的细胞株也不是很稳定,在长期稳定性研究中也会有下降趋势的。

大家可以谈谈各自用过的CHO亚系的经历和感受~~





  • CHO Quasispecies—Implications for Manufacturing Processes 来源历史.pdf(417.54k)

  • Development of transfection and high-producer screening protocols for the CHOK1SV cell system.pdf(410.37k)
2018-01-24 09:17
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laorentou 编辑于 2018-01-24 09:34
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laorentou
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  • 25楼
jackieustc

这个结论基本上是这样的,MSX靠的是整合到活跃位点实现高表达,否则细胞就活不下来。加压也可能会有一定的收获,但不是MTX的那种多轮加压,最多MSX额外加压一轮足够。

MTX靠得是多轮加压实现拷贝数的增加,但从几率上会不会不加压就有高表达的,我觉得一定会有,只是概率问题,确实更多靠加压实现稳定copy的扩增。

关于机制为什么是这样,这就是代谢的不同,但我也没深究这个的文献。如果我们做应用的,起码了解到你说的这个结论很有用。

相对于DHFR筛选系统,GS有几个优点;

1,不需要CHO细胞的DHFR缺陷型的宿主细胞(DG44),野生型的CHOK1就可以了。从文献来看稳定性稍差些,事实上也是这样的,原因是因为本体GS基因的表达导致外源GS表达下降;

2,相对而言比DFHR系统更能快速的获得高表达克隆,但DHFR可以在后期不断加压筛选高表达克隆,不考虑时间成本DHFR筛选的克隆要高于GS筛选的克隆;

3、还有一个就是代谢产物的影响,除GS系统外都会遇到代谢产物铵对细胞培养产生影响;

对于为什么GS不断加压不能提高表达量,而DHFR却能提高表达量(参考文献),机制不是很理解,问过分子生物学方面人,说是整合到染色体后基因活跃程度有关(也就是DHFR更活跃)。

附上两篇文献供大家参考,一篇GS一篇是DHFR~




  • GS system 2006 Limitations to the Development of Humanized Antibody Producing Chinese.pdf(350.32k)

  • gene amplification and vector engineering.pdf(402.61k)
2018-03-19 16:39
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张小雅yy

最近一直在纠结MSX和MTX压力筛选的本源问题。听过一个报告,说MTX随着梯度浓度增加,也能够使外源能到扩增。而MSX梯度加压是不能达到这种扩增效果的,意思也就说用一个浓度加压后筛选出来的细胞,在此基础上增加药物浓度,并不能提高蛋白的产量,而MTX是可以的,对于这个解说不知道各位有没有文献支持,,一直在寻找中



不是说你的基因拷贝数多了蛋白表达就会增加,关键是细胞代谢的平衡。打个比方,基因就像领导,领导指导蛋白合成,但是手下人不配合,再多的领导也是白搭,光喊口号去了
2018-03-13 19:46 来自 iPhone/iPad客户端
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