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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  蛋白表达纯化
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大肠杆菌诱导表达后菌体不能超声破碎

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楼主 lyping
lyping
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这个帖子发布于12年零339天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人在做一系列蛋白的表达,非常郁闷的是有两个蛋白表达菌株经IPTG诱导后收集菌体进行超声破碎却非常困难.其他的蛋白表达菌体都非常容易破碎,效果也很好.实验中用的表达载体是pET28a,SDS-PAGE检测蛋白表达的很好.所以特求高手赐教,这问题很令我头疼啊! 谢谢大家
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2007-01-07 20:14 浏览 : 3450 回复 : 11
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清风逐梦00
清风逐梦00
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  • 2楼
可以用溶菌酶室温先作用,再进行超声,
2007-01-08 10:51
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请修改标题格式,谢谢~~~
2007-01-08 10:54
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ding_chen
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  • 4楼
裂解细菌的方法很多,超声破碎应该是很不完全 的。我们是先在-80度反复冻融3-4次,再加溶菌酶处理半小时(注意PH值7,9-8,0)。再 去超声。你也可换个菌株BL21(DE3)plays ,里面表达蛋白同时表达了溶菌酶,只要冻融几次细菌就裂解的非常充分了。
2007-01-08 14:14
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