【求助】PCR产物纯化酶切,切不动
本人将pCAMBIA1301载体用Fermentas的EcoRI和NcoI酶切后,能切出800bp的目的条带,也用同样的酶和buffer切PCR产物(已纯化),后连接转化,多次不成功,也是醉了。于是怀疑PCR产物没被切动,便将载体酶切后分别胶回收和纯化(纯化的含有800bp片段),以摩尔比5:1比例添加酶切后PCR产物和胶回收及纯化后的酶切载体,连接转化后载体纯化的那一份长出了很多斑(感受态没问题,检测均为空载),但胶回收的没有长斑,于是就得出PCR产物未被酶切导致实验失败的结论。但不知如何解决这一问题,请问如何解决PCR产物充分酶切?