【实验求助】Annexin V/PI双染后流式检测结果解读

1、细胞分离培养
原代SD乳鼠心肌细胞分离，培养48h（10%血清+常糖培养基）后，饥饿12h（常糖培养基）。
2、缺氧复氧处理
对照组：培养24h（常糖培养基）。
处理组：缺氧4h（无糖培养基），复氧20h（常糖培养基）。
3、Annexin V/PI双染流式检测
收集上清液到15ml离心管
0.25%胰酶（不含EDTA）消化，血清中止，收集到上面的离心管
离心（1000转、5min），PBS重悬
用冰盒运输（20min路程），到那边的流式检测室染Annein V/PI，然后上机检测
4、结果
第一幅图是空白对照（消除自身荧光）
A1、B1、C1为对照组，A2、B2、C2为处理组

问题：
1、凋亡率的计算是LR还是LR+UR？
2、对照组：常糖培养基（不加血清）培养36h（12h饥饿+24h对照时间），凋亡率会这么高吗？
3、这个结果是不是存在假阳性？如何控制？缩短胰酶消化时间？（我是胰酶消化观察到细胞松动后，用移液*吹打3次）
4、能不能用TUNEL检测？见过相关文献报道过，不过个人认为TUNEL主观性太强。但Annexin/PI处理贴壁细胞，假阳性不可避免，重复性差。或者其他方法推荐
5、如果这个结果没问题，那我是不是要缩短复氧时间？这样可以检测更多的早期凋亡，同时减少晚期凋亡率。
6、常糖培养基加入血清，会不会减少对照组的凋亡率？
望各位战友出谋献策，谢谢！