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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  蛋白表达纯化
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【求助】如何减少透析过程中蛋白的析出(除去咪唑)

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楼主 wangmingcui
wangmingcui
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  • 1楼
这个帖子发布于11年零82天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好,想问个问题,当我的蛋白(等电点为10)用Elution buffer (250mM咪唑PH8)洗脱下来后,为了除去咪唑,我将蛋白放入透析袋中透析过夜,透析液曾经选用过灭菌蒸馏水、PBS(PH 7.4)为什么我的蛋白仍然大量析出呢?
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2008-09-17 13:13 浏览 : 4004 回复 : 8
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  • 2楼
袋子破了,换个新的3K透析袋。
2008-09-17 13:26
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  • 3楼
有些蛋白对溶液环境变化(尤其是pH)的敏感性可能比我们想象的要高的多,蛋白的理论等电点并不是用来防止蛋白析出时透析溶液PH值的唯一指标,所以可以考虑将pH值调回8。我以前就是使用前后不通缓冲液来透析,造成蛋白成絮状沉淀,但在后面我只是调整了溶液的pH值同开始的溶液pH相同后,蛋白透析正常。
2008-09-17 14:32
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wlnju
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  • 4楼
同意ls
或者可以梯度透析,不要蛋白洗脱液直接泡进PBS,用梯度咪唑透析
或者上脱盐柱也行啊。
2008-09-17 15:29
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