【交流】XhoI,BamHI双酶切和pEGFP重组载体构建

最近做一个克隆，目的基因大小为2000bp，选择的酶切位点是XhoI和BamHI。克隆载体为pcDNA3.1+和PEGFP-N1.
pcDNA3.1+载体成功构建，但是pEGFP载体的充值质粒却不能成功。双酶切能看见切下的小带（100bp以下），但是连接转化后，总是载体自连板上长的斑比添加了目的片段的板上长的菌斑多。做过空白对照，感受态和抗性没有问题。就算是载体没有完全切开，也不会导致对照组比实验组的菌斑还多呀。请高手指教。
酶切条件：TAKARA公司的酶，37度过夜（约10小时），50ul体系，DNA量按照其说明使用或稍微多一点。酶切时间3-5小时也试过，每次结果一样。载体换过一次，结果类似。
连接条件：NEB公司的酶，15ul，20度3小时。