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【求助】GST包涵体复性

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入门站友

1楼

这个帖子发布于11年零216天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

求教各位大侠：我表达的蛋白带有GST标签，但是是以包涵体形式存在，因为要用有活性的蛋白做后续实验，所以我选择用8M尿素溶解包涵体，然后又梯度复性，但是复性后的蛋白怎么也挂不上GSTFF柱，因为没有办法测活，所以我也不知道是复性没复好还是我超声的时候把GST标签损坏？
请大家帮帮忙
还有我同学有将十二烷基肌氨酸纳终浓度0.8%加入超声前的蛋白中，这样就可以使一一部分蛋白以可溶性形式出现，我只超声5分钟，就已经澄清，检测发现不少目的蛋白以可溶性形式出现，但是上柱后发现还是挂不住。我查资料说明可能是肌氨酸纳加太多，还有就是蛋白其实还是变性中，所以我想请问大家透析掉肌氨酸纳会不会效果好一些？还有，是不是肌氨酸纳与蛋白结合即使纯化出也有可能导致蛋白变性？
因为后续工作关乎毕业，请各位朋友帮帮小女硕吧？谢谢！！！！

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2008-05-14 11:55 浏览 : 2641 回复 : 11

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• 求指导，对有蛋白尿的患者，用利尿剂利尿的话，会增加尿蛋白吗？机制如何？

cobenlee

铁杆站友

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2楼

十二烷基肌氨酸纳是强蛋白变性剂，一般用量我记得好像是0.1%。
你的GST fusion 蛋白在变性条件下是挂上不GSTFF柱的，原因很简单，就是GST的构象已破坏，不会再和Glutathione结合了。glutathione sepharose fast flow 这种胶是在蛋白的Native状态下来纯化GST fusion protein 的。
建议：
优化表达条件，使目的蛋白部分可溶表达，比如降低表达时的温度，30，25，20度等。
也可以复性后再过GSTFF。

2008-05-14 12:25