请教一个关于连接的问题
请教各位师兄、师姐一个比较弱的问题。我最近做连接一直不顺,目的基因是PCR产物,约920bp左右,开始使用天为时代pBS-T载体,没有连上,再改用宝生物pMD-18T进行连接也没有连上。方法曾经使用过按说书、4度过夜等,曾经长出过菌落,但抽提后酶切全部都是空的。现在改用pECFP-C1质粒进行连接,酶切位点为Bgl II和BamH I(设计引物时加上的),试过宝生物的连接试剂盒V2.1、NEB的T4DNA连接酶和promega 的T4DNA连接酶,酶Bgl II是宝生物的,BamHI是NEB的,但始终没有转出阳性菌落来。马上就要毕业了,头大得很,请各位师兄、师姐指教,谢谢了。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 940