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蓝白斑问题

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楼主

水果婷

入门站友

1楼

这个帖子发布于7年零355天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

在做重组Bacmid实验中，当含有目的基因的pFBDM载体转化到DH10Bac细胞中，不用蓝白斑筛选直接挑菌酶切、PCR检测可以吗？老师说不用蓝白斑筛选会导致转座的失败，有没有科学依据呢？

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2011-12-25 21:02 浏览 : 2175 回复 : 1

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liubingood

丁香园版主

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2楼

蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。有色物质可以使整个培养菌落产生颜色变化，而颜色变化是鉴定和筛选的最直观有效的方法。实验中，通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素，这样，一次筛选可以判断出：未转化的菌不具有抗性，不生长；转化了空载体，即未重组质粒的菌，长成蓝色菌落；转化了重组质粒的菌，即目的重组菌，长成白色菌落。
所以，使用蓝白斑筛选后可以一举两得，既省功夫又可以使实验简化。而直接挑菌酶切、PCR检测的话就有可能挑出未转化的菌落，再酶切，走电泳，如果是阴性结果的话既浪费试剂又浪费时间，还得从头再来。而采用蓝白斑筛选后可以使实验的过程变得简单很多。

2011-12-28 11:05

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水果婷

入门站友

3楼

liubingood
蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。有色物质可以使整个培养菌落产生颜色变化，而颜色变化是鉴定和筛选的最直观有效的方法。实验中，通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素，这样，一次筛选可以判断出：未转化的菌不具有抗性，不生长；转化了空载体，即未重组质粒的菌，长成蓝色菌落；转化了重组质粒的菌，即目的重组菌，长成白色菌落。
所以，使用蓝白斑筛选后可以一举两得，既省功夫又可以使实验简化。而直接挑菌酶切、PCR检测的话就有可能挑出未转化的菌落，再酶切，走电泳，如果是阴性结果的话既浪费试剂又浪费时间，还得从头再来。而采用蓝白斑筛选后可以使实验的过程变得简单很多。

liubingood说的确实有道理，但是不用蓝白筛会影响转座吗，算了，我就不纠结了，还是蓝白筛选与抗性筛选一同使用吧，谢谢你啦

2011-12-28 14:50

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