【原创】流式细胞术中使用Flowjo补偿自动调节功能自动化调节补偿

早就听说flowjo的补偿自动调节功能，上网寻觅一圈都没有找到相应教程，实在忍不了了，就自己在此写个教程，希望能帮助到其他同学，废话不多。上教程，如果大家觉得不错，赏两个叮当，让我有更多的动力在为大家奉献一些小教程。

1.样品制备，及数据采集

我们实验室是BD公司的流式机，采集软件是cellqust pro，我的习惯都是采集数据以后，转用FLOWJO再继续分析，制图。样品制备同常。

下面以脾淋巴细胞CD4,CD8分群来做一简单介绍。

数据采集中，仍然要使用阴性管调节 阈值 电压 ，圈定大概的淋巴细胞的门。完成后，收细胞，保存数据为none.001

转cd4-pe的单阳样品，不用调节补偿，直接收细胞，保存数据为cd4-pe.002。

同样，转cd8-fitc的单阳样品，不用调节补偿，直接收细胞，保存数据为cd8-fitc.003

最后上样品和control组，收细胞，保存数据为sample.004，如果有control组，假设为control.005

（以上处理跟常规处理的主要区别，就是补偿调节都是0%，即不调节补偿，省去了补偿调节这一步，收细胞的速度是不是快了不是一点两点咧.)

2，自动补偿调节

将数据导入flowjo，本人用的是win环境下的lfowjo7.6.2xx版，有同学反应，文件不能导入或者导入细胞数是0，同学们可以试试将数据文件夹放在全英文路径下，同时有的从MAC系统拷来的目录，可以试着对文件夹从命名一下，也要是全英文，可能可以解决文件打不开的问题。

将以上文件全部拖拽进flowjo，使用NONE.001圈定淋巴细胞门LYM.将门拖拽到allsample让门应用到所有样本上。

这时候我们可以先看看sample.004的散点图，因为没有调节补偿，根本不是我们所能使用的图，更化不了象限，所以，我们开始调节补偿。

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选择windows，open compensation editor，在界面 中，有提示 drag compensation control here，我们把cd4-pe.002，cd8-fitc.003，none.001，3组依次拖放过去。把需要调节补偿的sample.004和假设的control.005拖放到左边的sample栏里去。点击finish，点击最下方的 all sample 选择 set allsample。

再打开sample的LYM门下的FL1,FL2散点图看一下吧。

我们回到补偿编辑面板看一下，他在处理过程中，自动生成了，补偿数据，也就是我们应该在收细胞前，调整的补偿数据。但这个样品是学生练手的样品，在制备样品弃上清的时候，他把一个单阳的细胞团给吸走了，所以，细胞数差异太大，FL1-FL2偏差到了37%，在手动调节的时候，也是这个样子。
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