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神经生物

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论坛首页  >  神经生物学讨论版   >  细胞培养
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【求助】PC12细胞类型的选择及培养方案的一点设想

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楼主 2011大爱无疆
2011大爱无疆
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这个帖子发布于9年零235天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
研究目的：药物对氧化损伤后PC12细胞的影响

三点疑问:

（1）通过查询中科院上海所细胞库及园内相关的帖子了解PC12细胞有三种类型：未分化型，低分化型，高分化型。http://neuroscience.dxy.cn/bbs/thread/15737574?keywords=PC12细胞#15737574

生理特性：加入ＮＧＦ后的24ｈ内细胞停止分裂,长出似交感神经元样的突起;第4～14ｄ,细胞体积增大,突起增多并增长,形成网络,数周后,突起可长达500～1000μｍ；分化的PC12细胞不可以传代？完全分化的PC12细胞停止增殖传代，NGF刺激的24－48h后，细胞可以消化下来传代或者冻存，用于继续培养。一般这种细胞叫做NGF activated cells。

http://neuroscience.dxy.cn/bbs/thread/18394589?keywords=PC12细胞#18394589

自己的构想方案：（1）可以购买PC12细胞未分化型用于增殖传代，待细胞数量到底自己的实验要求，进行分批诱导分化为不同分化程度的PC12细胞。这样的优点：可以获得大量的PC12细胞（有源）；缺点：需要购买NGF进行诱导分化（花钱）；（2）直接购买低分化型PC12细胞，既可以传代，又无需要加入NGF诱导，而且在传代的过程中也许分化程度慢慢提高，有利于神经突生长研究，一举三得？（3）直接购买PC12高分化型，直接拿来做神经突观察，但因为高分化，虽然不是绝对的完全分化，会因为增殖能力差，也许需要大量的高分化PC12细胞。（同原代细胞一样烧钱）。（4）以上全是多想乱想。

小结：综上还是选用低分化的PC12细胞？？希望又经验的战友老师指正，细胞选对了，既节约钱又有科学性，成功了第一步！！

（2）培养基的问题

未分化与低分化的PC12一般用DMEM(或者1640)+5%FBS+10%HS；高分化PC12只要用DMEM+10%FBS就可以. PC12细胞的高分化型很好养

http://neuroscience.dxy.cn/bbs/thread/18394589?keywords=PC12细胞#18394589
而中科院上海所细胞库提高低分化和高分化均为DMEM+10%FBS;未分化用1640++5%FBS+10%HS

http://www.cellbank.org.cn/detail_1.asp?id=254

基本上针对不同分化类型的PC12细胞用不同的培养基这个问题得到共识。

（3）诱导PC12细胞的培养基

这是我看文献遇到最大的问题，也是本次体外的核心问题。在一个实验中，PC12细胞的培养基居然有多种，归结起来这可能与要诱导PC12细胞和根据不同的试验设计有不同的要求有关，但是没有一个合理的介绍和使用介绍。

论坛里有相关的提问：国内文献中都没有具体说用NGF诱导PC12分化是培养基的成分。国外文献报道用DMDM+1%FBS or 1%HS，我们这样试过，发现细胞不用加NGF就可以分化

http://neuroscience.dxy.cn/bbs/topic/12462359?fromRecommend

小结：虽然不想通过先加入NGF诱导得到活得长出神经突的分化型的PC12细胞，但是想弄明白使用含低浓度血清培养基的作用，还有大胆的设想，是否可以通过使用ATCC推荐使用的完全培养基培养获得大量未分化型的PC12细胞后，自行通过去掉马血清或者改变胎牛血清浓度诱导未分化性PC12细胞分化用于神经突生长研究？

以上全是纸上谈兵，希望有实战经验的老师们提出宝贵的意见，万分感谢！！
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2011-04-06 21:23 浏览 : 23127 回复 : 44
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skyskytotop 编辑于 2013-07-28 05:42
  • • 医院转行药企——我做了理想世界的逃兵！
楼主 2011大爱无疆
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希望各位版主，战友发表下经验，你们的建议就是我成功的开端！
2011-04-07 09:22
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神经生物版就欢迎这样的讨论。自己拿出方案，引用多方面文献，供大家参考，引起大家的参与。这才是我们鼓励的。而不是简简单单地问一句“大家好，请问蔗糖饮水怎么做？”、“怎么养小胶质细胞？”。我一般不会理睬这种问题，顶多回答：“用大鼠做”，“在细胞间养”。

做科研一定要有自己的思考。别人嚼烂喂给你吃的，叫食糜，是糜烂的糜。

非常鼓励“2011大爱无疆”战友的问题，特别加分3分鼓励！
2011-04-07 10:10
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我没有养过细胞，所以无法给你回答，希望其他战友积极参与讨论～
2011-04-07 10:11
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