【求助】PC12细胞类型的选择及培养方案的一点设想
三点疑问:
(1)通过查询中科院上海所细胞库及园内相关的帖子了解PC12细胞有三种类型:未分化型,低分化型,高分化型。http://neuroscience.dxy.cn/bbs/thread/15737574?keywords=PC12细胞#15737574
生理特性:加入NGF后的24h内细胞停止分裂,长出似交感神经元样的突起;第4~14d,细胞体积增大,突起增多并增长,形成网络,数周后,突起可长达500~1000μm;分化的PC12细胞不可以传代?完全分化的PC12细胞停止增殖传代,NGF刺激的24-48h后,细胞可以消化下来传代或者冻存,用于继续培养。一般这种细胞叫做NGF activated cells。
http://neuroscience.dxy.cn/bbs/thread/18394589?keywords=PC12细胞#18394589
自己的构想方案:(1)可以购买PC12细胞未分化型用于增殖传代,待细胞数量到底自己的实验要求,进行分批诱导分化为不同分化程度的PC12细胞。这样的优点:可以获得大量的PC12细胞(有源);缺点:需要购买NGF进行诱导分化(花钱);(2)直接购买低分化型PC12细胞,既可以传代,又无需要加入NGF诱导,而且在传代的过程中也许分化程度慢慢提高,有利于神经突生长研究,一举三得?(3)直接购买PC12高分化型,直接拿来做神经突观察,但因为高分化,虽然不是绝对的完全分化,会因为增殖能力差,也许需要大量的高分化PC12细胞。(同原代细胞一样烧钱)。(4)以上全是多想乱想。
小结:综上还是选用低分化的PC12细胞??希望又经验的战友老师指正,细胞选对了,既节约钱又有科学性,成功了第一步!!
(2)培养基的问题
未分化与低分化的PC12一般用DMEM(或者1640)+5%FBS+10%HS;高分化PC12只要用DMEM+10%FBS就可以. PC12细胞的高分化型很好养
http://neuroscience.dxy.cn/bbs/thread/18394589?keywords=PC12细胞#18394589
而中科院上海所细胞库提高低分化和高分化均为DMEM+10%FBS;未分化用1640++5%FBS+10%HS
http://www.cellbank.org.cn/detail_1.asp?id=254
基本上针对不同分化类型的PC12细胞用不同的培养基这个问题得到共识。
(3)诱导PC12细胞的培养基
这是我看文献遇到最大的问题,也是本次体外的核心问题。在一个实验中,PC12细胞的培养基居然有多种,归结起来这可能与要诱导PC12细胞和根据不同的试验设计有不同的要求有关,但是没有一个合理的介绍和使用介绍。
论坛里有相关的提问:国内文献中都没有具体说用NGF诱导PC12分化是培养基的成分。国外文献报道用DMDM+1%FBS or 1%HS,我们这样试过,发现细胞不用加NGF就可以分化
http://neuroscience.dxy.cn/bbs/topic/12462359?fromRecommend
小结:虽然不想通过先加入NGF诱导得到活得长出神经突的分化型的PC12细胞,但是想弄明白使用含低浓度血清培养基的作用,还有大胆的设想,是否可以通过使用ATCC推荐使用的完全培养基培养获得大量未分化型的PC12细胞后,自行通过去掉马血清或者改变胎牛血清浓度诱导未分化性PC12细胞分化用于神经突生长研究?
以上全是纸上谈兵,希望有实战经验的老师们提出宝贵的意见,万分感谢!!