连接又失败了,急
本人由于要表达2kb的片断,用takara的Pyrobest酶P的产物,总是连不到载体中去。试过用Hind3和Bgl2分别双酶切PCR产物和载体后连接,前后用过3种载体,大小从2.9kb到5.5kb,都不行。又试过PCR产物加A尾后连接T载体(由于没有dATP,用dNTP代替之)。总之,每次转化后的板子上只有1-2个菌落,而阳性对照长得很多。提质粒酶切鉴定,全为空载体。已经连了3个月了,急煞我也。请各位高手支招。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2656
本人由于要表达2kb的片断,用takara的Pyrobest酶P的产物,总是连不到载体中去。试过用Hind3和Bgl2分别双酶切PCR产物和载体后连接,前后用过3种载体,大小从2.9kb到5.5kb,都不行。又试过PCR产物加A尾后连接T载体(由于没有dATP,用dNTP代替之)。总之,每次转化后的板子上只有1-2个菌落,而阳性对照长得很多。提质粒酶切鉴定,全为空载体。已经连了3个月了,急煞我也。请各位高手支招。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2656