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PCR技术

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论坛首页  >  PCR技术讨论版   >  QPCR
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【原创】miRNA用荧光定量PCR检测的流程以及汇总 [精华]

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楼主 qwasd1234
qwasd1234
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这个帖子发布于10年零329天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
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2010-06-01 14:30 浏览 : 169949 回复 : 358
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qwasd1234 编辑于 2014-11-25 10:15
  • • 看乡镇医院如何留住人
楼主 qwasd1234
qwasd1234
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四、试验操作流程
1、RNA提取
在以上两种RT引物中,Ologod(T)特异引物所需要的RNA尽量是用特殊试剂盒提取的小RNA,而茎环状结构RT引物需要RNA正常提取就好。
另外由于所需样本不同RNA提取方法也不完全相同,普通组织样本和细胞可以研磨用Trizol+氯仿抽提;血液和植物样本需要前期处理后再用Trizol+氯仿或用专门的Kit抽提。

2、反转录
确认用Oligod(T)特异RT引物时,RNA需要进行3'Poly(A)加尾处理。
反转录的酶没有特殊要求,操作请按照各自反转录酶的说明书进行就好。这里特别注意的是:反转录过程中用到的RT引物(常规的是随机引物、Oligod(T)和特异引物)是前面提到的Ologod(T)特异引物和茎环状结构RT引物,它们分别属于Oligod(T)和特异引物范畴,在反转录中不需要另外添加其他RT引物。
在确定反转录温度中请特别注意您使用的是哪一种RT引物,而设定相应的反转录温度。

3、荧光定量PCR
优化PCR体系(引物浓度、Mg浓度、dNTP浓度、退火温度等),正常操作。

――――――――The End.――――――

下面有关于以上两种反转录引物的设计的文献两篇,喜欢的自行下载,免费。
2010-06-01 14:37
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qwasd1234 编辑于 2010-08-06 09:26
  • • 基层诊室的故事
楼主 qwasd1234
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另外提供两篇RT引物设计的文献供大家参考(Loop RT Primer)。

  • microRNA by real-time PCR in gastric carcinoma.pdf(1587.75k)
2010-06-01 14:50
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qwasd1234 编辑于 2010-06-02 08:57
  • • 想考研,有支持的吗?
楼主 qwasd1234
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另外提供两篇RT引物设计的文献供大家参考(Oligod(T)RT引物)。

  • 实时定量PCR阵列检测小鼠大脑组织microRNA表达谱.pdf(410.55k)
2010-06-01 16:07
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qwasd1234 编辑于 2010-06-02 08:58
  • • 【吐槽】2021南京江宁区事业单位考试太不严谨了,有猫腻?!

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