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求助:四片段连接

发布于 2004-08-24 · 浏览 1471 · IP 广东广东
这个帖子发布于 20 年零 257 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位战友,我现在在做一个选择性感染噬菌体载体(SIP),我的方法就是将原噬菌体上的几段序列分别用不同的引物扩增出来,然后拼接这些片段成为一条长的完整的片段。再将这条长片段连进经酶切的噬菌体。但是我现在遇到不少困难,想请各位一同来研究。可以在这里给我回贴,也可以在MSN上和我讨论,我的MSN是vividlively@hotmail.com,一般晚上10点后在线。
见图片,我现在已经将前面三段片段连进T载体了,这三段很小,都不到100bp,而第四段很大,有1.8kb,连了几次都连不进T载体。我想把那几段小的片段先连起来,再接入T载体,然后酶切与1.8kb的片段连接。但是NB(由引物NBF/NBR扩增来的)和AN(由ANF/ANR扩增出来的)的混和PCR产物连进T载体后检测发现只连进了引物二聚体。AN和SA(由SAF/SAR扩增出来的)除引物不同外,其中间的部分是相同的,所以这两个片段很难做混和PCR。我做过一次没有成功。
另外,听说AvrII是很难切的酶。
现在是一堆的困难,所以请大家尽情讨论。
谢谢!
:D
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最后编辑于 2004-08-24 · 浏览 1471

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