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求救：western半干电转的参数设置

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楼主

musicfrog

普外科

丁香园准中级站友

1楼

这个帖子发布于17年零338天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我用20v70min半干电转后，胶染色仍然不完全，不知一般是多少？（145KD,另一个是45KD)

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2003-05-11 22:20 浏览 : 9177 回复 : 23

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biodna

丁香园荣誉版主

2楼

缓冲液没对吧，我们都只用15分左右就足够了
Western transfer using a semidry apparatus
http://grimwade.biochem.unimelb.edu.au/bowtell/biochem/sect31.htm
http://www.med.unc.edu/wrkunits/3ctrpgm/pmbb/mbt/WESTERN.htm

2003-05-11 22:59

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biodna 编辑于 2003-05-11 23:19

• 观片识病，欢迎讨论大家一起学习。

楼主

musicfrog

普外科

丁香园准中级站友

3楼

上次转了70min，胶染色仍然有蛋白，不知为何？

2003-05-12 13:42

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biodna

丁香园荣誉版主

4楼

根本要不了70分，BIO-RAD体系推荐小胶电压10－30V, 大胶20－30V，10－30分或据染色预试决定，但通常不超过30分；缓冲液和电流很重要，不管半干或全湿转移缓冲液都是不需调pH的，越调越乱，千万不能短路；若分子量大可在20很后适当提高电压同时减低或不用甲醇。

2003-05-12 14:20

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