紧急求助单酶切连接!
现在我正在做单酶切连接,做了将近一个月,还没有成功,我把目的片段从T载体上用CLAI切下来了,感觉切得也挺好,挺亮的,并做了胶纯化回收。同时把载体质粒也用CLAI切好,但电泳时发现用CLAI切过的线性载体质粒竟然比环状载体质粒跑的还快,不知道这里会不会有问题。接下来我把酶切过的载体胶纯化回收再进行了5个小时去磷酸化处理,再把线性载体质粒与目的片段分别以1:5和1:3用T4连接酶16度过夜连接,第二天挑菌提质粒进行CLAI酶切都切不下来,连做了3次都这样,望指教。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2582