紧急求助：脂质体转染293后，细胞全部飘起
发布于 2004-07-28 · 浏览 5360 · IP 湖北湖北
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最近进行腺病毒包装，但以Lipofectamine 2000 转染293后不到1天，细胞几乎全部脱壁飘起，几次实验均告失败。
腺病毒骨架质粒酶切完全，纯度也高，293细胞转染前贴壁状态一直很好（购自上海新基因，代次较低），严格无菌操作，实在不知何故，还请各位高手赐教
主要步骤如下：
1. 提前一天293铺6孔板（约3×10E5），无抗生素完全DMEM培养，24h后完全贴壁，汇合度90％以上。
2. 质粒4ug,LF 2000 为10uL（每孔），以Opti-MEM稀释，步骤严格按说明书。
3.293更换无血清DMEM，轻柔加入以上脂质体混合物，6h后换完全DMEM。
但是不到24h几乎90％以上的细胞都死亡和飘起来，但又无污染迹象。所以根本无法进行以后CPE观察，试了几次都是如此，几乎要绝望了。特请教各位。
腺病毒骨架质粒酶切完全，纯度也高，293细胞转染前贴壁状态一直很好（购自上海新基因，代次较低），严格无菌操作，实在不知何故，还请各位高手赐教
主要步骤如下：
1. 提前一天293铺6孔板（约3×10E5），无抗生素完全DMEM培养，24h后完全贴壁，汇合度90％以上。
2. 质粒4ug,LF 2000 为10uL（每孔），以Opti-MEM稀释，步骤严格按说明书。
3.293更换无血清DMEM，轻柔加入以上脂质体混合物，6h后换完全DMEM。
但是不到24h几乎90％以上的细胞都死亡和飘起来，但又无污染迹象。所以根本无法进行以后CPE观察，试了几次都是如此，几乎要绝望了。特请教各位。
最后编辑于 2004-07-28 · 浏览 5360
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