为何连接如此的困难？

各位大侠，我做连接一个多月，至今仍未成功，期间也看了许多相关的贴，也试了很多办法，就是转化不长斑。我的具体情况是：
原核表达载体pET28b+，约5k多，用EcoR1＋Sal1酶切，中间相隔一个酶切位点，酶是TaKaRa的
insert,1.3k左右，用同样的酶从pMD18-T Simple Vector 上切，分别回收，再进行连接，CaCl₂法转化DH5a ，JM109等，就是不长斑，而CK^＋用pET28b+，长斑正常（但CK不是每次都做）。

几乎每个环节都已试过几种方法，胶回收用过Kit，也试过低熔点的，也定过量，摩尔比从1：3～1：10都试过，连接酶用过TaKaRa T4 DNA Ligase，和它的ligation Kit Ver2.11，TOYOBO的Ligation High，体系从10～30ul 都做过，程序用过16度，连接过夜，还有其他实验室高手推荐的所谓高低温来回穿梭的循环连接程序，还是不奏效！

另有几个基本的问题：
1。有战友说体系不能太大，最好10ul左右，为什么？大一点到底会有什么样的影响？增加自连吗？还是减少连接事件发生的几率（不管是自连还是相连）
2。连接时DNA（载体和片段）浓度有上限吗？浓度增加为什么反而会降低连接效率呢？
3.转化时，为什么100ul的感受态细胞最好不要加超过10ul的连接产物，是会降低转化效率呢（原因是什么），还是只是会增加自连的情况，增大筛选的工作量？
恳请各位高手指点！