请教-pET表达

各位大侠:
   小妹初来乍到,刚从事分子生物学研究不久,现碰到两个问题想向各位请教:
(1)我在用pET载体表达一个细胞因子时,以非融合方式在pET-28a中看不到任何表达条带，当我用NcoI和HindIII将其原封不动切下并栽入pET-22b中却获得了明显的表达条带，但是无论我怎样优化条件，结果出来的绝大部分是以包涵体形式存在。而当我试图在pBV220中标达时却依然看不到表达条带；融合到pET-32a中不但表达量很低，而且表现出对细菌生长明显的抑制作用。这种情况下，我怎样才能获得表达水平较高且不带有大肠杆菌信号肽的天然蛋白质？怎样解释我的实验结果？
（2）当我试图用NdeI 和BamHI将基因导入pET-22b时，却老是重组不进去，作了许多遍，得到的都是空载体，请问这是什麽原因？