一种替代RACE的方法--Universal Fast Walking (UFW)
发布于 2004-07-05 · 浏览 6008 · IP 浙江浙江
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1. 涉及到几个同方向的基因特异性引物，其中一个3’端带有简并核苷酸N10
2. 用简并引物和另一个带有N10的引物做RT-PCR
3. EcoI切除未配对的单链，填充粘性末端
4. 变性、退火，形成套索结构（lariat structure）
5. 作为模板做Nested PCR
这里给出原理图，5' Unknown Region类似
优点：(1)可用于某些无法RACE的情况（表达量低、过长的ORF等等）
(2)完全Nested PCR，避免了某些RACE的Archor或者Semi-nested PCR
(3)可以逐步地拿到3’和5’的全序列，增加全克隆成功率
2. 用简并引物和另一个带有N10的引物做RT-PCR
3. EcoI切除未配对的单链，填充粘性末端
4. 变性、退火，形成套索结构（lariat structure）
5. 作为模板做Nested PCR
这里给出原理图，5' Unknown Region类似
优点：(1)可用于某些无法RACE的情况（表达量低、过长的ORF等等）
(2)完全Nested PCR，避免了某些RACE的Archor或者Semi-nested PCR
(3)可以逐步地拿到3’和5’的全序列，增加全克隆成功率
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 6008
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