有关RACE的问题
发布于 2004-07-05 · 浏览 3120 · IP 浙江浙江
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现在拿到一段cDNA序列(约1kb),根据其设计了一对GSPs,产物194bp
用这对引物在很多组织的RT-PCR产物中一次PCR扩增出预期片段
而用RACE产物(5'和3')做模板时,同样的条件得不到任何条带,现在无法做RACE PCR
因为这两个平行做过,一个出来一个没有,基本上可以确信是模板的问题
目的cDNA比较长(估计范围4kb-8kb),会不会RACE过程中mRNA被降解或者说很难得到全长的RACE cDNA?
RT-PCR用的是SuperScript cDNA Synthesis System (Invitrogen)
RACE用的是FirstChoice RLM-RACE Kit (Ambion)
用这对引物在很多组织的RT-PCR产物中一次PCR扩增出预期片段
而用RACE产物(5'和3')做模板时,同样的条件得不到任何条带,现在无法做RACE PCR
因为这两个平行做过,一个出来一个没有,基本上可以确信是模板的问题
目的cDNA比较长(估计范围4kb-8kb),会不会RACE过程中mRNA被降解或者说很难得到全长的RACE cDNA?
RT-PCR用的是SuperScript cDNA Synthesis System (Invitrogen)
RACE用的是FirstChoice RLM-RACE Kit (Ambion)
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 3120
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