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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版
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请教蛋白质表达和包涵体复性高手

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楼主 riboenzyme
riboenzyme

丁香园荣誉版主

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  • 1楼
这个帖子发布于16年零226天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教各位战友,我在实际工作中遇到几个问题,不是很明白

(1)我看到在包涵体复性过程中需要加精氨酸,浓度在0.5-0.7M,我不知道这里精氨酸在复性过程中有什么作用,我这个蛋白大概40 KD左右,有16个半胱氨酸。
另外,高浓度的精氨酸注射到人体内会有影响么?

(2)我有以疏水性很强的多肽,30个氨基酸左右,在水中溶解度很小,在大肠杆菌中加了6个His融合表达,全部是包涵体,不知道各位是否有什么高招让疏水性很强的多肽获得可溶性表达。

先谢谢了
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2004-06-11 22:40 浏览 : 3211 回复 : 4
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linan2
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  • 2楼
精氨酸可助溶,但精氨酸是代谢产物高浓度对人可能不好。
另外甘氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸有助溶作用。你可以试一试。祝你好运!
2004-06-11 23:30
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gongrui
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  • 3楼
对于疏水蛋白的可溶表达,可以降低诱导温度(可以试试4度诱导过夜)和IPTG的量,降低蛋白的表达速度,从而减少包涵体形成的速度,增加正确折叠蛋白的量。或者换成GST融合表达载体,GST可以增加后面融合蛋白的可溶表达。
2004-06-15 17:37
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zhouxy22
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  • 4楼
我的蛋白包涵体在经变性纯化后透析复性过程中,在透析液中加入了1%的甘氨酸和5%的甘油,有一定的助溶效果。我想对于你的情况,由于含有二硫键,还要加入一定比例的谷胱甘肽,才能形成正确的二硫键。复性是一个很难捉摸的过程,不同蛋白的复性条件也各不相同。耐心摸索吧,祝你好运!
2004-06-15 20:17
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