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蛋白质和糖学

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请教蛋白质表达和包涵体复性高手

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楼主

丁香园荣誉版主

1楼

这个帖子发布于16年零57天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

请教各位战友，我在实际工作中遇到几个问题，不是很明白

（1）我看到在包涵体复性过程中需要加精氨酸，浓度在0.5－0.7M，我不知道这里精氨酸在复性过程中有什么作用，我这个蛋白大概40 KD左右，有16个半胱氨酸。
另外，高浓度的精氨酸注射到人体内会有影响么？

（2）我有以疏水性很强的多肽，30个氨基酸左右，在水中溶解度很小，在大肠杆菌中加了6个His融合表达，全部是包涵体，不知道各位是否有什么高招让疏水性很强的多肽获得可溶性表达。

先谢谢了

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2004-06-11 22:40 浏览 : 3041 回复 : 4

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常驻站友

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2楼

精氨酸可助溶，但精氨酸是代谢产物高浓度对人可能不好。
另外甘氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸有助溶作用。你可以试一试。祝你好运！

2004-06-11 23:30

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• 不是每一个中年男性的「啤酒肚」，都是发福…

铁杆站友

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3楼

对于疏水蛋白的可溶表达，可以降低诱导温度（可以试试4度诱导过夜）和IPTG的量，降低蛋白的表达速度，从而减少包涵体形成的速度，增加正确折叠蛋白的量。或者换成GST融合表达载体，GST可以增加后面融合蛋白的可溶表达。

2004-06-15 17:37

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• 2020 卫生高级职称考试来了，真题回忆（8.3更新）

常驻站友

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4楼

我的蛋白包涵体在经变性纯化后透析复性过程中，在透析液中加入了1%的甘氨酸和5%的甘油，有一定的助溶效果。我想对于你的情况，由于含有二硫键，还要加入一定比例的谷胱甘肽，才能形成正确的二硫键。复性是一个很难捉摸的过程，不同蛋白的复性条件也各不相同。耐心摸索吧，祝你好运！

2004-06-15 20:17

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